我國食藥用蕈菇類與松露菌生物多樣性及永續利用開發之研究 (三)

本計畫之總目標希望瞭解我國蕈菇類資源生物多樣性與生理機能活性之關聯，並開發具機能保健潛力的食藥用蕈菇類資源物種。在菇類生理活性指標的純化與活性探討方面，本年度(第三年)分別自我國金頂側耳(Pleurotus citrinopileatus Sing.)、杏鮑菇(Pleurotus eryngii)、雞腿菇(Coprinus comatus)及舞菇(Grifola frondosa)中，純化得到四種免疫調節蛋白，此四種均為新發現之蛋白。金頂側耳蛋白PCiP (MW 15 kD)，可促進脾臟細胞增生與分泌細胞激素IFN-gamma，可顯著直接活化RAW 264.7巨噬細胞(p < 0.05)產生nitric oxide與TNF-alpha。杏鮑菇蛋白PPE (MW 45 kD)可直接活化小鼠脾細胞，使細胞增生與分泌細胞激素IFN-gamma，同時對RAW 264.7 巨噬細胞株亦具直接活化作用，可促使其產生 TNF-alpha與nitric oxide (NO)。純化自雞腿菇之免疫調節蛋白CCP分子量17.8 kDa，可直接活化RAW 264.7巨噬細胞產生NO與TNF-alpha。舞菇免疫調節蛋白PGF (MW 44 kDa)可活化小鼠脾細胞，使細胞增生與分泌細胞激素IFN-gamma，但對LPS誘導的RAW 264.7巨噬細胞而言，卻降低其NO與TNF-alpha之產生量。在抗腫瘤活性方面，以台灣常見食用菇類(金頂側耳及杏鮑菇)之乙醇萃出物作為實驗材料，以MTT assay瞭解樣品萃出物對人類肝癌細胞(Hep 3B)的抑制效果，並進行抗氧化實驗，以瞭解樣品萃出物的自由基清除能力，此外，並以HPLC進行此等樣品之三萜類含量分析。實驗結果顯示金頂側耳與杏鮑菇濃度在1000 μg/mL之下，皆沒有顯著抑制肝癌細胞生長的趨勢。HPLC分析的三萜類含量結果顯示，兩種樣品皆有類似三萜物質的存在，但因其含量太少或是並非有活性之三萜，因此沒有表現出抗肝癌細胞之活性。而在抗氧化方面，在螯合亞鐵離子實驗中，兩種樣品皆無螯合金屬離子之能力。在還原能力試驗中，在1 mg/mL的樣品濃度下，金頂側耳的還原能力(62 μg/mL L-ascorbic acid equivalent)較杏鮑菇強(18 μg/mL)。DPPH自由基清除試驗的結果為金頂側耳(IC50 = 133.5 μg/mL)優於杏鮑菇(IC50 = 977.7 μg/mL)。最後在總抗氧化力方面，依舊是以金頂側耳的TEAC值較高(0.367 mM)，杏鮑菇為0.044 mM。兩種食用菇具有抗氧化的潛力，但似乎無抗癌能力。台灣松露菌是台灣之珍貴且瀕臨滅絕之共生真菌，因其子實體於成熟時具芳香及高的蛋白質及氨基酸含量，故具有潛在之開發利用價值。台灣松露菌只在石灰質土壤才能形成子實體，因此矽質土壤必須以施用石灰才能維持台灣松露的生產。本年度計畫之目的為 (1) 確定台灣松露菌分離出之菌絲體能與青剛櫟或二葉松形成外生菌根 (2) 調整根域土壤之pH值在7.0以上，完成除草及預估產菇量。