台灣原生林分子鑑別技術之構建

本研究利用穩定性較高的DNA分子標誌技術來鑑定屬內不同植物在DNA序列上的差異。設計特定引子擴增出ITS片段後將片段定序後，將土肉桂與陰香及臺灣肖楠與翠柏之ITS片段進行比較，就其兩者在ITS片段上的差異點，設計出特異性引子來進行兩者的片段之擴增，藉此來觀察兩者電泳跑膠之條帶差異，鑑定其種類。 實驗採集臺灣各地區天然分布之土肉桂與臺灣肖楠及大陸陰香與翠柏之葉片材料，每樣株選取成熟、無病蟲害之樣本，脫水乾燥。將葉片樣本取適量置入磨缽研磨後，進行萃取Genomic DNA。萃取完後利用分光光度計測定DNA濃度。以適當濃度之DNA當作模板，利用本實驗所設計能鑑別樟科樟屬及土肉桂與陰香之專一性引子套組(gene specific primer set)，進行PCR檢測。實驗結果顯示利用引子組ITS2-F、D4-R、BI-F及ITS2-R，可以對土肉桂與陰香的檢體DNA成功的擴增出PCR產物，而經洋菜膠電泳結果判讀條帶大小，如有產生286 bp長度之條帶者，即可判定檢體DNA為臺灣土肉桂及陰香所屬之樟屬植物；如有產生206 bp者，即可進一步判定為外來種的陰香；如有產生125 bp長度之條帶者，即可進一步判定檢體為臺灣土肉桂。本研究同時利用通用引子組對擴增台灣肖楠與翠柏的核糖體內轉錄第二區間(ITS2)的DNA序列，經比較其序列的差異後，成功設計出專一引子對組413-F、M875-R、F875-F 及1038-R可以用來分子鑑別臺灣肖楠及翠柏。經洋菜膠電泳結果判讀PCR擴增所得條帶大小來進行鑑別，如有產生626 bp條帶大小者，即可判定為臺灣肖楠及翠柏所屬之肖楠屬植物；如有產生483 bp者，即可進一步判定為外來種翠柏；如有產生183 bp者，即可判定為臺灣肖楠。 本實驗研究成果可以提供一種分子鑑別的方式，應用於鑑別來自大陸之陰香與翠柏與台灣原生種的土肉桂與肖楠，解決近年來因兩者幼苗因形態類似而造成判定不易的困擾，進而減少林農及林區因為誤種而造成的經濟損失。