臺灣相思樹黃酮類成分生合成之調控及應用

相思樹（Acacia confusa Merr.）為臺灣常見特有樹種，主要分佈於低海拔山地與丘陵地，為傳統用藥之一。相思樹枝條、葉片和花皆富含黃酮類化合物，經實驗證實具良好的抗氧化能力，極具開發為抗氧化保健用品之潛能。其中，主要分離出的黃酮類化合物為黃酮醇類（flavonol）。爲瞭解黃酮醇類化合物於相思樹內的生合成機制，本研究依據基因資料庫中木本植物之黃酮醇合成酶序列設計退化性引子對，藉由聚合酶鏈鎖反應（polymerase chain reaction, PCR）及cDNA末端快速擴增法（rapid amplification of cDNA end, RACE）獲得996 bp的相思樹黃酮醇合成酶之轉譯區序列，以及60 bp之5’端非轉譯區和312 bp之3’ 端非轉譯區，並將此基因命名為AcFLS。經分析預測此蛋白質大小約為37.5 kDa。本研究將所得基因構築於histidine tag (his-tag) 融合蛋白質系統的載體pET-21a(+)，在大腸桿菌（Escherichia coli BL21）表現AcFLS蛋白質。經蛋白質活性分析，發現其具有將基質二氫楊梅素（dihydromyricetin）和二氫檞皮素（dihydroquercetin）分別轉變成楊梅素（myricetin）和檞皮素（quercetin）的能力。本研究為臺灣相思樹首次進行黃酮類相關基因層級的研究，對相思樹的黃酮醇類生合成機制有進一步的瞭解和參考價值。