臺灣相思樹黃酮類成分生合成之調控及應用

相思樹（Acacia confusa）之葉、花、枝條、樹皮與心材含有豐富的黃酮類化合物，並且具有良好的抗氧化活性，這些黃酮類主要為黃酮醇化合物。本研究中，以聚合酶鏈鎖反應及cDNA末端快速擴增法，由相思樹葉片獲得查爾酮合成酶（AcCHS）、查爾酮異合酶（AcCHI）以及黃酮醇合成酶（AcFLS）基因全長，此三基因之核酸序列轉譯區長度分別為1170 bp、720 bp以及996 bp，對應產生43 kDa、26 kDa和38 kDa的蛋白質。以鄰近連接演化樹分析法（Neighbor-joining）分析親緣關係，發現AcCHS、AcCHI以及AcFLS分別被歸類於CHS超級基因家族中的CHS、非豆科專屬的Type I CHI以及2-ODD超級家族中的FLS。經過反轉錄聚合酶連鎖反應檢測，發現相思樹小苗AcCHS，AcCHI以及AcFLS的表現在葉組織最佳；而成齡相思樹之AcCHS，AcCHI以及AcFLS在花的表現最爲明顯。此外，爲了鑑定AcFLS之活性，本研究以高效液相層析儀檢測此蛋白質體外反應之產物。首先將AcFLS建構在His-tag系統之表現載體pET-21a（+），並轉型至大腸桿菌中進行大量蛋白質表現，經過不同的基質檢測結果，AcFLS可將二氫楊梅素、二氫檞皮素以及柚皮素分別轉化成楊梅素、檞皮素以及山奈醇。